La constante de Michaelis (Michaëlis) est une constante thermodynamique caractérisant une réaction enzymatique. Elle est symbolisée par Km et reflète l'affinité de l'enzyme pour son substrat :
- Plus elle est grande, moins bien l'enzyme se fixe sur le substrat, l'affinité de l'enzyme pour le substrat est petite. Les enzymes peu actives possèdent une Km relativement élevée. Par exemple les protéases.
- Plus elle est petite, mieux l'enzyme se fixe sur le substrat, l'affinité de l'enzyme pour le substrat est grande. Les enzymes très actives possèdent une Km relativement petite. Par exemple les peroxydases.
La constante de Michaelis est caractéristique de l'enzyme.
Km est la concentration en substrat pour laquelle la vitesse initiale de la réaction est à la moitié de la vitesse initiale maximale. Cette constante est une concentration, elle a la même unité : mol.L.
Un inhibiteur compétitif augmente la constante de Michaelis. Un inhibiteur non compétitif pur ne fait pas varier la constante de Michaelis. Un inhibiteur mixte (ou incompétitif) peut faire augmenter ou diminuer la constante de Michaelis.