Bromure d'éthidium

Bromure d'éthidium
Général
Nom IUPAC
N CAS	1239-45-8
N EINECS	214-984-6
Apparence	solide: rouge-brun en solution: rouge foncé à orange selon la concentration Goût amer
Propriétés chimiques
Formule brute	C21H20BrN3
Masse molaire	394,308 ± 0,02 g·mol
Propriétés physiques
T° fusion	511-513 K (238 à 240 °C)
Solubilité	à 20 °C: 50 g·l d'eau, 1,3 g·l de chloroforme
Précautions
Directive 67/548/EEC

T+

L'éthidium (synonymes: homidium, moins couramment novidium, babidium ou RD 1572) est un composé organique aromatique possédant un ammonium quaternaire de formule chimique C₂₁H₂₀N₃. Schématiquement, la molécule est constituée de deux groupements aniline soudés de part et d'autre à un groupement pyridine, substitué par un groupement phényle.

L'éthidium a été développé dans les années 1950 comme médicament pour lutter en Afrique contre les infections des bovins dues à des trypanosomes (responsables de la maladie du sommeil), étant encore utilisé actuellement dans cette indication. Une dose de 1 mg·kg permet de traiter les animaux infectés. Cette dose possède également un effet prophylactique permettant d'empêcher l'infection durant trois mois.

L'efficacité du bromure d'éthidium pour le marquage de l'ADN a été découvert en 1965, et utilisé pour la première fois en 1973.

Utilisé contre Trypanosoma congolense et Trypanosoma vivax, agents de la maladie du sommeil infectant principalement le bétail. Le chlorure d'éthidium étant plus soluble que le bromure (200 g·l contre 50 g·l) ce sel est préféré car il permet la préparation de solutions plus concentrées et donc de délivrer les mêmes doses avec des volumes réduits.

Le bromure d'éthidium (abrégé BEt ou EtBr) est un agent d'intercalation couramment utilisé comme marqueur d'acide nucléique dans les laboratoires de biologie moléculaire. Lorsqu'il est exposé à des rayonnements ultraviolets, il devient fluorescent avec une couleur rouge-orangée, 20 fois plus intense lorsqu'il est lié à l'ADN. Cet effet serait dû à l'augmentation de l'hydrophobie de l'environnement, plutôt qu'à une rigidification du cycle benzénique, celui-ci n'étant pas situé entre les paires de bases.

L'utilisation la plus courante est la coloration des gels destinés à la séparation des fragments d'ADN par électrophorèse. Le BEt peut être mélangé à l'agarose lors de la préparation du gel, ou le gel peut être plongé dans une solution de BEt une fois la migration effectuée. Dans les deux cas, la concentration finale en BEt avoisine 0,5 μg·ml (la concentration de la solution stock étant couramment de 10 mg·ml). Dans le cas d'une électrophorèse sur gel de polyacrylamide, la coloration ne peut se faire qu'après migration, le BEt inhibant la polymérisation de l'acrylamide.

Le bromure d'éthidium permet également de colorer l'ARN, en s'intercalant parmi les bases de courtes régions complémentaires. Cependant, puisque la plupart des ARN ne sont pas en double brin, à masses égales la coloration de l'ARN est nettement moins intense que celles de l'ADN.

+ ultracentrifugation CsCl₂

Le bromure d'éthidium est un produit dangereux, qui doit être manipulé avec précautions. Les résidus doivent être éliminés comme un déchet dangereux. Le bromure d'éthidium ayant la faculté de se lier à l'ADN, il possède un effet mutagène important, et pourrait être également cancérigène et tératogène. À l'heure actuelle, aucune étude n'a cependant démontré un effet cancérigène.

En France, l'INRS propose l’iodure de propidium comme produit de remplacement.

Voir aussi : section "colonne de filtration" de l'article colonne de biologie moléculaire.

Phrases de risque et conseils de prudence

Les indications présentes sur les étiquettes recommandent pour la manipulation du BET de porter des gants en vinyle. En effet, le latex est poreux au BET qui le traverse en moins de 5 minutes.