Le 49e parallèle est utilisé pour démarquer une partie de la frontière sud entre le Canada et les États-Unis. À noter cependant que la capitale fédérale, Ottawa, ainsi que sept des dix capitales provinciales sont situées plus au sud que le 49e parallèle, à savoir : St John's (Terre-Neuve-et-Labrador), Halifax (Nouvelle-Écosse) , Charlottetown (Île du Prince-Édouard), Fredericton (Nouveau-Brunswick), Québec (Québec), Toronto (Ontario) et Victoria (Colombie-Britannique).
Le traité de 1818 spécifie qu'il sert de frontière à l'ouest de la longitude du point le plus au nord-ouest du lac des Bois. Le traité de l'Oregon de 1846 fixe sa limite ouest à l'île de Vancouver.