Histologie - Définition

Techniques histologiques

Il existe de nombreuses techniques histologiques.

Prélèvements

Les prélèvements, quels qu'il soient doivent être effectués avec le plus grand soin, car leur qualité conditionne directement les possibilités d'étude.

• Pour les tissus végétaux, le prélèvement utilise des méthodes particulières (écrasement, empreinte par vernis etc.)
• Pour des tissus animaux (et notamment humains), on distingue quatre catégories majeures de prélèvement :
  • Les frottis : prélèvement médical au moyen d'un écouvillon stérile, d'une petite brosse ou d'une petite spatule (par exemple au niveau du col de l'utérus)
  • Les biopsies : prélèvement de très petite taille d'un tissus, à des fins d'étude microscopique.
  • Les résections d'organes en intégralité, suivies de leur étude. (Dans le cas d'une tumeur, déterminer le caractère bénin ou malin par exemple)
  • Les ponctions de liquides (pleurale, ascitique, péricardique, etc.)

Il existe également des techniques de prélèvement plus sophistiquées : par excision, microdissection. Des prélèvements sont fréquemment réalisés au cours d'une opération, et sont étudiés directement au bloc opératoire par cryostat.

Conservation

Afin de conserver l'échantillon dans un état le plus proche possible de l'état in vivo, deux moyens de conservation peuvent être utilisés :

• La congélation, utilisée pour les prélèvements en salle d'opération dont le diagnostic doit être connu rapidement (examen extemporané);
• La fixation par un produit chimique comme le formol ou le bouin, qui a pour effet de polymériser les protéines et, dans certains cas, les lipides présents dans l'organe. Cette technique est utilisée pour les coupes histologiques "longues durées" après inclusion en paraffine.

Amincissements

Les organes, trop gros pour laisser passer la lumière nécessaire à la microscopie optique, doivent encore être découpés en lamelles extremement fines par un appareil appelé microtome. Pour cela, on les enrobe dans de la paraffine ou une résine, selon l'épaisseur souhaitée de la coupe. On distingue plusieurs types de coupe selon la méthode de conservation et d'amincissement suivie :

Les coupes de 0,05 μm seront analysées en microscopie électronique tandis que les autres seront observées en microscopie optique.

Coloration

Afin de distinguer les différents tissus, on peut avoir recours à différents colorants. Parmi les différentes techniques de coloration, l'Hématoxiline-Éosine permet une coloration bleue du noyau et rose du cytoplasme. Les techniques d'hybridation permettent de détecter les acides nucléiques, alors que d'autres techniques sont employées pour différents cas comme l'utilisation d'anticorps, de la fluorescence, de sondes (chaude = radioactive ou froide), de sphères d'or colloïdales, d'électrons de diamètres différents (de 8 à 20 um), le couplage avidine-biotine, etc.